全国服务热线400-689-6719

最新研究成果

行业动态

联系我们

实验操作视频dwsysp

细胞传代实验操作

细胞为什么要传代:细胞株在培养过程中数量会不断地增加,但是我们用 来培养细胞的培养皿/瓶的空间是有限的,这就导致了细胞之间接触过于紧 密,会使得细胞的增殖受到抑制,所以我们必须把其中一部分细胞挪到别 的培养皿/瓶,让细胞有足够的生长空间。
实验操作流程:
1在缓冲间更换鞋子后,进入更衣间间,更换实验服,戴上口罩和实验用手套。
2进入细胞房。超净工作台已提前紫外照射30min后通风30min,放置显微镜的 台面也使用酒精擦拭。
3打开培养箱,取出待观察的细胞于显微镜下观察,确定要进行的处理方式,完 成观察后将细胞放回培养箱。本次观察的细胞处理方式为传代。
4酒精棉擦拭擦拭操作区域,点燃酒精灯。
5将实验所用培养基(也已提前恢复至室温)消毒外表面后放入超净台中,分装 培养基。
6从培养箱取出待传代的细胞,待细胞酒精消毒培养皿外表面后放入超净台中。 7收集旧培养基于10ml离心管中。
8PBS清洗二遍(PBS加入时靠着培养皿边缘加入,每次清洗更换一根滴管)。
9加入0.25%胰酶(含0.02%EDTA)1.5ml与培养皿中,上下左右轻轻晃动培 养皿,使得胰酶能够完全覆盖培养皿表面,将培养皿放入培养箱中,消化三分钟。
10准备传代用的新皿。
11到达消化时间后从培养箱中取出培养皿,在显微镜喜爱观察细胞是否消化完 全,消化完全后,使用旧培养基吹打制悬:用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬 液后再收集至离心管中,配平后放入离心机中离心,贴壁细胞离心转速采取 1000rpm/min,离心3min。
12完成离心后弃去离心上清(弃上清时细胞沉淀朝上,以防止弃上清时细胞沉 淀被培养基冲起)先在离心管中加入新鲜培养基3ml重悬细胞,再在新皿中加 入培养基9ml,根据细胞生长状况进行传代,此次选择的传代密度为1:3,因此 取离心管中的细胞悬液1ml新的已准备好的培养皿中。
13显微镜下观察细胞密度,确定细胞密度合适后放回培养箱中培养。
14完成实验后清理实验和超净台台面。

上一篇:无
下一篇:大肠杆菌感受态细胞的热激转化

东洪简介技术平台实验方法科研成果行业动态公司新闻

留言 / LEAVE A MESSAGE

联系我们 / CONTACT US

上海展辉生物技术有限公司
地址:上海市浦东新区东方路
联系电话:400-689-6719
联系邮箱:3369352092@qq.com
联系我们: 4006896719

关注我们 / FOCUS ON


扫一扫
关注东洪博元更多动态

Copyright 2012-2017 上海展辉生物技术有限公司 版权所有
关键词: 蛋白组学 流式细胞检测 动物造模 基因测序 基因敲除  western blot 透射电镜 免疫组化 原代细胞分离 载体构建 荧光定量PCR  技术支持:汉邦传媒 

沪ICP备17013725号-2