1.  MSP原理：MSP是一种简便、特异的、敏感的检测单基因甲基化的方式。其基本原理是用亚硫酸氢钠处理基因组DNA，未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变，然后用3对特异性的引物对所测基因的同一核苷酸序列进行扩增。扩增产物用DNA琼脂糖凝胶电泳，凝胶扫描观察分析结果。

     （1）在50ul体系中，DNA（2~5 μg）经NaOH（终浓度值0.2 mol/L）在37℃变性10 Min。对于ng级别的人基因组DNA，在进行修饰前加入2μg蛙鱼精DNA为载体。

     （2）加入30 μl刚配制好的10 mmo/L 氢醌与520/1的40.5%亚硫酸氢钠混匀，之后石蜡油隔绝空气的条件下，避光在50%温育16 h。

     （3）修饰后的DNA过WizerdDNA纯化柱，用50/1 L 水洗脱。室温下用NaOH（终浓度为0.3 mol/L）修饰5 min，之后用乙醇沉淀。

     （4）DNA溶于20 μl 水中，立即使用或在-20℃保存。

       3.  MSP优点与缺点：与其他方法相比，MSP从非甲基化模板背景中检测甲基化模板的敏感性大大提高，是最敏感的甲基化测定方法。其缺点是需要两组已知的关键性CpG位点设计上下游引物，并且这些位点必须完全甲基化或完全不甲基化。

       事实上，能够完全满足这些条件的基因数目不多，该方法具有明显的基因“选择性”。在很多情况下，为了扩增PCR产物，不得不降低退火温度，其后果是形成许多非特异性产物。随着退火温度的降低，该方法可靠性也随之下降。

       （本文转载丁香通）