交叉电泳实验技术-上海中洪博元

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交叉电泳实验技术

（一）原理
凝胶电泳

交叉免疫电泳是把琼脂平板电泳和火箭电泳结合起来的一种方法。先将抗原样品在琼脂凝胶中进行电泳分离，然后使已分开的各抗原成分与原泳动方向呈90度角的方向泳向含抗体的琼脂凝胶中，于是该抗原样品中的各个抗原成分和它相对应的抗体依次形成若干锥形沉淀线，根据沉淀线的位置及面积（或高度）可确定该抗原的质和量。

此试验可以用来鉴定抗原，即与标准抗原抗体系统相比较，就可知待测样品中抗原的质和量。此法也可以鉴定抗体，把未知的含抗体的样品与标准抗原反应，所得的结果与标准的抗原、抗体反应结果比较，从而可以确定其中所含抗体成分及其滴度。

（二）试剂及材料

1．巴比妥缓冲液 0.05mol/L pH8.2。

2．1%琼脂糖或优质琼脂以巴比妥缓冲液配制。

3．pH7.2 PBS液

4．抗原

5．抗体

6．电泳仪、玻板、吸管、滴管等。

（三）操作方法

1．取10cm×10cm的洁净玻板，加1%溶化琼脂糖10ml，铺匀、冷凝。

2．打孔，在距阴极端2cm，玻板边2.2cm处，打孔。

3．将一定浓度的抗原加入孔内，将抗原孔置于负极，电泳。电压10V/cm，泳动1h。

4．电泳结束后，切除非抗原电泳部分的琼脂（约6cm×10cm）。

5．取上述1%溶化的琼脂糖10ml放入60℃水浴中，加入预热的适当浓度的血清抗体迅速混匀，铺入切去的琼脂部分。冷却后，用不含抗体琼脂密封切口。

6．将玻板与原电泳方向成90度角放置，使泳动后的抗原凝胶置于负极，电泳。电压为3V/cm，泳动10h~20h。

7．漂洗、染色、脱色、烘干。

（四）结果判定

与标准抗原抗体锥形沉淀线比较，判定和分析结果。

（五）注意事项

1．抗原抗体的最适稀释度必须事先摸索好。

2．第二次电泳时间的长短以观察锥形沉淀线的出现为准。电泳时间长短不一，短的可2h即出现。

（本文转载丁香通）

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