DNA斑点和狭线印迹实验-上海中洪博元

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分子生物学技术miRNA

DNA斑点和狭线印迹实验

斑点和狭线印迹是一种将混合的未经分离的面定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上进行杂交分析的简单技术。用来检测被印迹的1DNA制品中靶序列的相对丰度。

多样抽滤法

实验材料

DNA

试剂、试剂盒

SSCNaClNaOHTris·Cl

仪器、耗材

紫外透射仪电泳仪多样抽滤加样器

实验步骤

1. 裁一张与多样过滤加样器一样大小的尼龙膜，将膜置于6×SSC的表面让其自然浸没。放置10 min。

2. 裁一张与多样过滤加样器一样大小的Whatman 3 MM 滤纸，用6×SSC浸湿。

3. 将Whatman 3 MM 滤纸置于多样抽滤加样器上，将膜放置于其上。将多样抽滤加样器按厂商说明书安装好，确保装置中不漏气。

4. 在DNA中加入20×SSC使其终浓度为6×SSC，体积为200~400 μl，在100℃变性10 min，然后置于冰中。

5. 连接吸液装置与多样抽滤加样器，每孔中加入500 μl 6×SSC。

6. 将DNA样品离心5 s，将样品加于各孔中，小心勿让吸头触及膜，让样品滤过。

7. 拆开多样过滤加样器装置，将膜置于一张浸过变性液的Whatman 3 MM 滤纸上，放置10 min。

8. 将膜转至一张浸过中和液的的Whatman 3 MM 滤纸上。放置5 min。

9. 将膜置于一张Whatman 3 MM 滤纸上，晾干。

10. 将尼龙膜置于可透过紫外线的塑料夹层中，将有DNA的一面朝下置于紫外透射仪上照射适当的时间以固定DNA。

11. 将晾干的膜夹于Whatman 3 MM 滤纸之间，室温下可保存数月。

DNA检测

（本文来源丁香通）

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