一.   服务介绍                          

       荧光PCR检测

目的：

       对RNasin性能效果进行检测及评估。

  二.实验材料以及设备                    

       模板RNA：大鼠肌肉组织RNA检测

       引物：Rat β-acting：Forward CCCATCTATGAGGGTTACGC

                 Reverse TTTAATGTCACGCACGATTTC 

       RNase：50mg/ml（simgen）

       RNasin：40U/µl

       cDNA第一链合成试剂盒（simgen）、2×SYBR Green PCR mix（simgen）

设备：

       ABI 7000 荧光PCR仪、普通PCR仪、离心机及移液器

其他耗材：

       0.6ml离心管，八连排管，RNase-free吸头，一次性手套及防护用品和纸巾。

  三.实验方法：                         

       利用逆转录反应将RNA逆转录成cDNA及SYBR Green荧光PCR方法对RNasin产品的性能效果进行检测评估。

设计思路：

       1. 编号1-4为测试同一批RNasin的性能，1号与3号是测试相同RNA量和RNase量，加不加RNasin对cDNA合成的影响，即RNasin抑制RNase的活性效果。

       2. 4号是表示在不添加RNase和RNasin时的空白对照。

实验步骤：

       表1 gDNA去除反应体系

注：

       2. RNase的浓度分别为1ng/µl和10ng/µl，故在加入RNase时均加入2µl，保证不同的量相同体积，以减少误差，在加RNase的时候应尽量在无RNase的环境中添加，以免环境中RNase过多而导致RNA降解严重从而在荧光PCR上反映不出差异。

        3. RNasin的浓度为40U/µl，添加RNasin应在加RNA之前添加。后续cDNA合成步骤参考cDNA第一链合成试剂盒（simgen）说明书操作。所得cDNA稀释5倍，置于冰上备用。

       荧光PCR步骤参考2×SYBR Green PCR Mix（simgen）说明书操作。

       将稀释好的cDNA模板按照5µl/管加入到荧光PCR反应体系混合液中，进行荧光PCR扩增，观察实验结果。

      (本文转载丁香园）