全国服务热线400-689-6719

最新研究成果

行业动态

联系我们

病理平台

PCNA步骤

 一.   服务介绍                           


       增殖细胞核抗原(ProliferatingCellNuclearAntigen简称PCNA)由Miyachi等于1978年在SLE(系统性红斑狼疮)患者的血清中首次发现并命名,因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名,以后的研究发现PCNA与细胞DNA合成关系密切,在细胞增殖的启动上起重要作用,是反映细胞增殖状态的良好指标,因此近年来掀起了对PCNA研究的热潮,尤其在肿瘤方面。


 二.实验方法                            
PCNA步骤跟一般的免疫组化步骤基本一样
1、脱蜡、水化


        1)  60 ℃×20 min→Xylene 2 ×10 minutes;


        2)  100% absolute ethanol:2 ×5 minutes;


        3)  95% ethanol 2 minutes;


        4)  80% ethanol 2 minutes;


        5)  70% ethanol 2 minutes;


        6)  PBS洗3次×3 min


        7)封闭内源性过氧化物酶: 3%的过氧化氢,室温封闭10min


        9)  PBS溶液洗3次×3 min。
3、抗原修复暴露抗原决定族


       10)  切片放入0.01 M柠檬酸钠缓冲溶液(pH6.0)后,在微波炉里高火4 min至沸腾后,再加热约6 min×4次,每次间隔补足液体,防止干片。
4、封闭非特异性蛋白


        11)  PBS溶液洗3次×3 min;


        12)  将切片取出,周围水分用滤纸吸干,用组化笔在组织周围画上圈,在圆圈内组织滴入5%羊血清(与二抗来源一致)后放入湿盒中,室温30(10~30)min;
 
5、一抗孵育


        13)  甩去切片上的羊血清,用滤纸擦干组织周围残留血清,直接加入已稀释的一抗后,放入湿盒中室温1小时,然后4度过夜,从冰箱中取出需37 ℃复温45 min。
 6、二抗孵育


       14)  将一抗倒掉并用PBS洗5 min×5次;


       15)  用滤纸将圆圈周围的水吸去,加入已稀释的二抗后放入37 ℃恒温烤箱中30 min(回收)。


       16)  用PBS洗5次×5 min;
7、SP反应


       17)  加入SP后放入37度烤箱中30 min。


       18)  用PBS洗5次×5 min;
8、显色


       19)  加入DAB(快速滴入,观察染色情况,倒掉染液),显色时间控制在约5 min(3~10 min),由镜下观察颜色控制时间。
9、复染、脱水、透明、封


        20)  用PBS 3次×3min后,用双蒸水洗5 min;


        21)  加一大滴苏木素染液,胞核蛋白染几秒,胞浆或胞膜蛋白染20 s后自来水冲洗,双蒸水洗5 min,再用PBS返蓝5 min。


        22)  脱水:


       70% ethanol 1-2 min


       95% ethanol 1-2 min;


       95% ethanol 1-2 min;


       100% absolute ethanol: (1-2) min;


       100% absolute ethanol: (1-2) min。


        23)  透明:Xylene 1×(1-2) min→Xylene 2×(1-2) min


        24)  封片:中性树胶。

      PCNA步骤

       (本文来源丁香园)


上一篇:单克隆抗体技术
下一篇:Van Gieson染色

东洪简介技术平台实验方法科研成果行业动态公司新闻

留言 / LEAVE A MESSAGE

联系我们 / CONTACT US

上海展辉生物技术有限公司
地址:上海市浦东新区东方路
联系电话:400-689-6719
联系邮箱:3369352092@qq.com
联系我们: 4006896719

关注我们 / FOCUS ON


扫一扫
关注东洪博元更多动态

Copyright 2012-2017 上海展辉生物技术有限公司 版权所有
关键词: 蛋白组学 流式细胞检测 动物造模 基因测序 基因敲除  western blot 透射电镜 免疫组化 原代细胞分离 载体构建 荧光定量PCR  技术支持:汉邦传媒 

沪ICP备17013725号-2