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【课题实验整体外包】-大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR检测方法的建立与应用

目的:建立快速检测实验大鼠冠状病毒和仙台病毒的双重PCR方法。

方法:根据大鼠冠状病毒 N 基因、仙台病毒 L 基因设计特异性引物;经过双重PCR优化,特异性和敏感性的检测,建立双重PCR体系。 应用该 PCR体系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本和实验动物组织样本,并与ELISA方法比对。

结果:双重PCR扩 增出大鼠冠状病毒(168bp)和仙台病毒(262bp)目的条带,PCR扩增产物测序结果利用核酸BLAST功能进行同源 序列对比,仙台病毒和大鼠冠状病毒同源性分别为100%和99%。 仙台病毒和大鼠冠状病毒的检测下限为1.56× 102copies/μL。 特异性检测对小鼠肝炎病毒扩增,产生片段大小近似大鼠冠状病毒产物。 应用建立的双重PCR体 系检测人工感染仙台病毒组织DNA样本,30份DNA标本均被检出;检测94份实验动物肺组织样本,结果均阴性。

结论:建立的双重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对实验动物仙台病毒和大鼠冠状病毒 病原体的快速检测。

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