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免疫实验技术

  • 免疫组化技术的原理、分类和优点

    一、免疫组化技术的基本原理应用免疫学及组织化学原理,对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。众所周知,抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性,即先将组织或细胞中的某些化学物质提取......

    2017-07-14
  • 免疫荧光非特异性染色的消除

    1、产生非特异性染色的主要因素免疫荧光染色(1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。(2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。(3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗原(如Forssman氏抗原),可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合......

    2017-07-11
  • 甲胎蛋白时间分辨荧光免疫分析

    近年发展的时间分辨荧光测量技术以稀土离子为示踪材料,具有测量灵敏度高、操作简便、示踪物稳定、定量分析量程宽、无放射性污染和应用范围广等优点。我们采用时间分辨荧光测量技术,建立了AFP时间分辨荧光免疫分析(time-resolvedfluoroimmunoassay,TRFIA)。免疫荧光分析一、材料与方法1.材料与试剂......

    2017-07-07
  • 间接免疫荧光法检测自身抗体

    自身抗体诊断的标准技术是间接免疫荧光法,其特点是特异性强,阳性与阴性样品的信号强度对比明显,通过显微镜观测能够精确地判断组织或细胞内荧光的分布。自身抗原的位置决定了其相应抗体的典型的荧光模式,所有与此典型模式不相关区域的染色被认为是非特异性染色。即使偶尔伴有强的非特异性染色,但弱......

    2017-07-04
  • 免疫组化常见问题及其解决办法

    1、一抗从4度拿出后,为什么要进行37度复温?(1)一方面,防止切片从4度直接放入PBS易脱片;(2)另一方面,使抗原抗体结合更稳定。一般不需要,但对表达较弱的抗原可能有用,4度和37度时分子运动方式不同,前者分子碰撞机率和运动速度小于后者,后者结合更快,但敏感性也提高了并易造成非特异染色。(3)其实,我更赞同后一种......

    2017-06-29
  • Western Blot 中如何选择内参抗体

    WesternBlot即免疫印迹试验,可以利用WesternBlot来比较在不同条件下,不同细胞组织中目的蛋白表达量的差异,属于定性,半定量试验。既然有差异性比较,参照物必不可少。WesternBlot试验中的标准(表达量)参照物即内参,有了参照物才能准确地比较目的蛋白表达量的差异。内参一般选用管家基因表达的蛋白,它们......

    2017-06-27
  • 免疫组化具体步骤中的一些问题

    问题:我现在刚开始做石蜡切片免疫组化,具体操作过程中有些问题想要咨询一下1.脱蜡至水:二甲苯III各10分钟后100%95%85%75%酒精各多久呢(因看各个版本的介绍都不同)2.只搞一个浓度的酒精如95%时间稍微长一些可以吗?3.抗原修复:可以枸橼酸加热至沸腾再放入切片保温5-10分钟吗?冷却至室温这步可以将切......

    2017-06-21
  • WB结果背景过高原因之——“心急吃不了热豆腐”

    实验外包天气渐热,心情也难免有些烦躁。这样一来WB也出鬼了,胶片上不时的出现极高的背景,整张膜上都是黑的,看上去好像是在墙壁上泼墨后留下的污渍似的。那这是跑胶的问题?还是转膜?显影?……?重复……重复……重复,再重复……直到某天早上我咬牙切齿的盯着那几条蓝色的带往下跑的时候,蓦然发现:浓缩胶漏......

    2017-06-19
  • 免疫染色

    免疫染色1.将膜置封闭液中,室温摇晃30~60分钟,封闭非特异性结合位点。2.用封闭液稀释特异性抗体,根据抗体的量预先确定稀释度,通常1:100~1:10000之间。将膜从封闭液中取出,置抗体稀释液中,室温摇晃反应30~60分钟。用封闭液洗涤膜4次,每次10分钟。3.用封闭液稀释结合碱性磷酸酶(或辣根过氧化物酶)的第二抗体,根据......

    2017-06-19
  • 贴壁细胞免疫荧光(间接染色) 方法

    材料和试剂免疫荧光1.圆形盖玻片(Fisher)2.DPBS(Invitrogen)3.FBS(Atlanta)4.抗褪色封固剂:如ProLongGoldantifadereagentfromInvitrogen,withDAPI(ifneednuclearstaining)orwithoutDAPI.5.多聚甲醛(Sigma)6.常用化学试剂(Sigma)实验步骤1.让细胞生长在放入24孔细胞培养板中的圆形盖玻片上,使......

    2017-06-16
  • FITC标记抗体的方法

    一、FITC的特性实时荧光PCR异硫氰酸荧光素(FITC)呈黄色、橙黄色或褐黄色粉末或结晶,性质稳定,在室温下能保存两年以上,在低温中可保存多年。易溶于水和酒精。最大吸收光谱为490~495nm,最大发射光谱为520~530nm,呈现黄绿色荧光,分子量为398.4.在碱性条件下(pH8.5以上),FITC的异硫酸基在水溶液中与免疫球蛋......

    2017-06-16
  • 如何选择常用抗体标记荧光染料

    随着免疫荧光技术的不断发展,荧光染料及其标记的抗体偶联物也被广泛的应用于生物学实验中。目前,市场上抗体及蛋白标记的荧光染料主要有CFTM系列(BIOTIUM,USA);AlexaFluor®系列(Lifetechnology,USA);DyLight系列;Cy系列;IRDye系列等等。使用最多的为AlexaFluor®系列和CFTM系列。一、CFT......

    2017-06-15
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