免疫实验技术
免疫染色
1.将膜置封闭液中,室温摇晃30~60分钟,封闭非特异性结合位点。
2.用封闭液稀释特异性抗体,根据抗体的量预先确定稀释度,通常1:100~1:10 000之间。将膜从封闭液中取出,置抗体稀释液中,室温摇晃反应30~60分钟。用封闭液洗涤膜4次,每次10分钟。
3.用封闭液稀释结合碱性磷酸酶(或辣根过氧化物酶)的第二抗体,根据抗体的量预先确定稀释度,通常在1:200~1:2 000之间。将膜置酶标记抗体稀释液中,室温摇晃反应30~60分钟。用封闭液洗涤膜4次,每次10分钟。
4.用50ml TBS洗涤膜,去除磷酸和Tween 20。在底物液中显色10~30分钟,注意观察显色情况。显色完成后,用大量双蒸水洗涤膜终止反应。观察结果并照相。
(本文转载丁香通)
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