本世纪60至70年代对大肠杆菌的研究使之成为自然界中最普遍为人们所认识的生物体。大肠杆菌具有两个显著特征：操作简单和能在廉价的培养基中高密度培养，它的这些特征加上十多年外源基因表达的经验使其在大多数科研应用中成为高效表达异源蛋白最常用的原核表达系统。尽管大肠杆菌有众多的优点，但并......

巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应（PCR），使用两对（而非一对）PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。实验方法原理由于巢式PCR反应有两次PCR扩增，从而降......

问题一：如何在pubmed上找到目标基因的DNA序列以及其内含子和外显子情况。步骤：打开NCBI主页面，选GENE，输入基因名称-》显示出很多不同种但名字相同的基因（fig.1）-》找到你要的种属，打开-》显示基因信息，找到"Genomicregions,transcripts,andproducts",点击基因名称；links到geneback（fig.2）-》显示了该基......

（一）原理凝胶电泳交叉免疫电泳是把琼脂平板电泳和火箭电泳结合起来的一种方法。先将抗原样品在琼脂凝胶中进行电泳分离，然后使已分开的各抗原成分与原泳动方向呈90度角的方向泳向含抗体的琼脂凝胶中，于是该抗原样品中的各个抗原成分和它相对应的抗体依次形成若干锥形沉淀线，根据沉淀线的位置及面积......

RT-PCR检测辛辛苦苦提完RNA，逆转录后一个个孔加完引物和模板，最后进行RT-PCR，你以为这样就可以美滋滋地坐等结果了？等到一幅下面这样的结果图，不知道对于刚接触RT-PCR的你来说内心是否是崩溃的？这是啥？怎么看？别急，让我慢慢跟你介绍，看完后你就能准确的分析出你的RT-PCR结果了。（这里以7500软件为例进行......

miRNA检测过去几十年来，基于疫苗的免疫疗法在治疗癌症方面取得了长足的发展。然而，这类方法的抗癌效率却由于肿瘤的免疫耐受效应而变得十分有限。树突状细胞是天然免疫与后天免疫的桥梁，它对肿瘤免疫反应的启动一级调节都具有重要的作用。不幸的是，在肿瘤微环境中DC往往缺乏成熟的条件，而且功能也......

结晶紫法活性测定蛋白检测1、取对数生长期的人胰腺癌SW1990细胞，用0.25%胰酶（以无钙镁离子PBS溶液配制，pH7.4）消化后，加入RPMI-1640培养基（10%新生牛血清，100U/ml青霉素，100U/ml链霉素，pH7.2）吹打细胞，使形成细胞悬液。进行细胞计数，使细胞数为2~2.5×105个/ml。接种于96孔细胞培养板，100µl/孔。接种细胞......

NorthernBlotPreparationofFormaldehydeAgaroseGelThegelconditions(1%agarose,1XMOPS,6.3%formaldehyde)aredesignedfor~4hoursofelectrophoresis.Iflongertimesarenecessary,theformaldehydeconcentrationshouldbeincreased.1.Heatagaroseinwatertogettheagaroseintosolution.2.Cooltheagar......

一、荧光原位杂交（FISH）是一种简单、敏感、而容易操作的方法，结果迅速，并能在同一标本上检测多个不同的基因，可应用于细胞培养、染色体分裂像、冰冻切片和石蜡切片。FISH技术是利用特异的DNA探针，标记了生物素，地高辛、或荧光素，对检测细胞进行DNA-DNA原位杂交，并用荧光法显示。FISH实验步骤试剂配制：（1）......

1．启动子启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列，它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子，基因就不能转录。由于细菌RNA聚合酶不能识别真核基因的启动子，因此原核表达载体所用的启动子必须是原核启动子。原核启动子是由两段彼此分开且又高度保守的核苷酸序列组成，对mRN......

小分子RNARNA一度被认为仅仅是DNA和蛋白质之间的"过渡"，但越来越多的证据清楚的表明，RNA在生命的进程中扮演的角色远比我们早前设想的更为重要。RNA干扰（RNAinterference）的发现使得人们对RNA调控基因表达的功能有了全新的认识，更因为可以简化/替代基因敲除而成为研究基因功能的有力工具，因此格外引......

Single-cellRT-PCR单细胞RT-PCR技术创立于1991年，随着时间发展，其技术不断完善，在神经生物学、胚胎发育、免疫学等领域都有进一步发展。1.单细胞的获得第一步是获得单个完整的细胞，注意：快速精确操作，尽量减少在操作中由于外界刺激和时间过长引起的细胞表达上的改变，以及外源RNA和RNA酶的污染；目前常......

荧光定量PCR一、主要实验步骤如下：1、设计并合成RealtimePCR引物。2.引物溶解后使用Promega的TaqDNA聚合酶进行含SG（SYBR®；Green）的PCR反应的优化。3.客户样品RNA抽提。a.实验对象为组织样品，取适量（50-100mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品加1ml的RNA抽提试剂Trizol（Invitrogen），匀浆后抽提RNA......

定量PCR1.如果扩增曲线ct值比较靠后的话，32左右，一般有什么方法解决没有。ct值比较靠后，对实验有一定的影响，因为经过那么多次的循环，酶的活性有可能有所下降，这时候扩增效率会有所改变（而定量PCR的理论基础就是每次循环的扩增效率我们认为是确定的一个值）。因此最好能够把ct值往前移。解决办法可以将......

基因检测2014年7月，央视日前报道了湖南、湖北、安徽、福建等4省存在转基因大米的新闻，引发社会极大关注。记者在武汉市一家大型超市，随机购买5种大米。经检测后发现，这5种大米中，有3种含转基因成分：Bt63。Bt63是一种抗虫害的基因，它是苏云金芽孢杆菌基因中的杀虫晶体蛋白基因，可以有效防止鳞翅目等多......

PCR-SSCP是1989年日本Orita等创建的筛查突变的新技术。它是一种简单、快速、经济的点突变筛查手段。PCR-SSCP技术的基本原理是PCR扩增后的DNA片段经变性成单链DNA，单链DNA在中性聚丙烯酰胺凝胶中电泳时形成不同的立体构象，其构象直接影响泳动速率，相同长度的DNA单链其核苷酸顺序仅有单个碱基的差......